构建BAC亚克隆库的方法,申请号CN200510011979.3-传众专利搜索

构建BAC亚克隆库的方法

申请公布号：CN1884575B

申请号：CN200510011979.3

申请日期：2005.06.21

申请公布日期：2010.08.18

申请人：

中国农业大学

发明人：徐明良;田秀红;李建生;戴景瑞;郑德刚;杨琴

分类号：C12Q1/68(2006.01)I;C12P19/34(2006.01)I

主分类号：C12Q1/68(2006.01)I

代理机构：

北京路浩知识产权代理有限公司 11002

代理人：司君智

地址：100094 北京市海淀区圆明园西路2号

摘要：本发明提供了一种改进的BAC亚克隆库构建方法。主要通过以下步骤实现：BAC DNA的提取和纯化；BAC DNA的片段化及末端修补；目标片段的回收及与载体的连接；连接产物的转化。以玉米为例，构建的BAC亚克隆库中，克隆数超过1500，空克隆和大肠杆菌DNA污染率低于5％，插入片段平均为3kb。该方法具有简便、廉价、快速、高效的优点。

主权项：一种BAC亚克隆库的构建方法，包括以下步骤：1)碱裂解法提取BAC DNA；2)琼脂糖凝胶电泳分离BAC DNA和大肠杆菌基因组DNA；3)切取BAC DNA胶，加入溶胶液，用注射器抽打溶解了包含BAC DNA的胶块溶胶液，使BAC DNA断裂成≤50kb的片段，并用凝胶回收试剂盒回收纯化；4)将BAC DNA片段化，经纯化后进行末端修补；5)回收目标片段并与载体连接；6)转化连接产物，其中步骤3)在凝胶回收试剂盒回收纯化时，在漂洗及洗脱DNA之前使用去蛋白液洗吸附柱。