一种快速直接定向诱导鼠胚胎干细胞分化为神经上皮细胞的方法,申请号CN201410199624.0-传众专利搜索

一种快速直接定向诱导鼠胚胎干细胞分化为神经上皮细胞的方法

申请公布号：CN104450618B

申请号：CN201410199624.0

申请日期：2014.05.12

申请公布日期：2015.11.04

申请人：

南通大学

发明人：卞菁;郑娇

分类号：C12N5/079(2010.01)I;C12N5/0793(2010.01)I

主分类号：C12N5/079(2010.01)I

代理机构：

南京知识律师事务所 32207

代理人：张铂

地址：226019 江苏省南通市啬园路9号

摘要：本发明公开了一种快速直接定向诱导鼠胚胎干细胞分化为神经上皮细胞的方法，通过向贴壁培养的鼠胚胎干细胞团状克隆中加入含有dorsomorphin与noggin、SB431542和CHIR99021的诱导培养基，诱导鼠胚胎干细胞细胞形成玫瑰花状神经球；随后加入含有bFGF的第二阶段诱导培养基悬浮培养形成悬浮的神经球；最后将神经球消化成单细胞，然后用第三阶段诱导培养基贴壁培养形成具有较长期的自我增殖与更新的神经上皮细胞。本发明摒弃了传统的形成EB方法，缩短了分化时间，而且分化的效率达到了95％以上。本发明可快速诱导NE细胞替代NSC细胞功能治疗中枢系统损伤，具有很高的临床应用性。

主权项：一种快速直接定向诱导鼠胚胎干细胞分化为神经上皮细胞的方法，其特征在于包括如下步骤：(1)第一阶段：向贴壁培养的鼠胚胎干细胞团状克隆中加入含有dorsomorphin与noggin、SB431542和CHIR99021的诱导培养基，连续培养若干天，细胞每天换液,诱导鼠胚胎干细胞形成玫瑰花状神经球；(2)第二阶段：消化并挑出第一阶段的神经球，加入含有bFGF的第二阶段诱导培养基悬浮培养形成悬浮的神经球；(3)第三阶段：将神经球消化成单细胞，然后用第三阶段诱导培养基贴壁培养形成具有自我增殖与更新能力的神经上皮细胞。