一种支原体中药最低抑菌浓度检测新方法,申请号CN201510122026.8-传众专利搜索

一种支原体中药最低抑菌浓度检测新方法

申请公布号：CN104673877A

申请号：CN201510122026.8

申请日期：2015.03.19

申请公布日期：2015.06.03

申请人：

山东畜牧兽医职业学院

发明人：杨明彩;徐斌;杨明娟;隋兆峰;徐建义;迟灵芝;崔健;宋慧珍;张静;张忠玉

分类号：C12Q1/18(2006.01)I;C12R1/35(2006.01)N

主分类号：C12Q1/18(2006.01)I

代理机构：

北京众合诚成知识产权代理有限公司 11246

代理人：龚燮英

地址：261061 山东省潍坊市胜利东街88号

摘要：本发明涉及一种支原体中药最低抑菌浓度检测新方法，该方法对传统的药敏实验方法进行改进，利用其生长过程中的代谢产物改变培养基的pH值这一点，发明新方法，用pH计检测支原体培养物的pH值，通过pH值的高低来判定中药对支原体的最低抑菌浓度，并通过对培养条件的处理、试管尺寸的改进替代96孔板、pH计所得数据中，将下降阶段数据第一个与(-)试管数据差值大于等于-1的试管，该试管的前一试管中的药物浓度，即为最低抑菌浓度。本发明相对传统方法操作更为简单、便捷，通过精密pH计配合数据处理方法，使颜色较深的中药对支原体的最低抑菌浓度的判断更为方便、直观、准确，该方法尤其适用于颜色较深的中药的支原体MIC检测。

主权项：一种支原体中药最低抑菌浓度检测新方法，其特征是：该方法包括以下步骤：步骤1)：取目标中药，将所述目标中药通过煎煮、浓缩为0.5g/mL的药液，高压灭菌；对待检支原体培养物进行复苏，并准备液体培养基；步骤2)：取12支长度为7cm、半径为1.5cm的玻璃试管，灭菌后依次编号为“(‑)、①、②、③、④、⑤、⑥、⑦、⑧、⑨、⑩、(+)”，放入合适的试管架上；步骤3)：向(‑)试管中加入2mL步骤1)所述液体培养液；向①、②、③、④、⑤、⑥、⑦、⑧、⑨、⑩、(+)11支试管中各加1mL步骤1)所述液体培养液；步骤4)：向①试管中加入1mL步骤1)所述药液，将①试管中药液与液体培养液用移液器充分混匀，然后递倍稀释至第⑩管；步骤5)：向①、②、③、④、⑤、⑥、⑦、⑧、⑨、⑩、(+)11支试管中，各加入0.8mL液体培养液和0.2mL菌液的混合液；步骤6)：将12支试管塞紧胶塞，在无光条件下于37℃恒温箱中培养7～15天培养；通过pH计来测定各管内培养物的pH值；步骤7)：将经步骤6)处理的12支试管，通过精密pH计来测定(‑)、①～⑩、(+)管内培养物的pH值，取依次记录数据；①～⑩试管数据为一先升后降的pH变化趋势，找到其下降阶段数据中，第一个与(‑)试管数据差值大于等于‑1的试管，该试管的前一试管中的药物浓度，即为最低抑菌浓度。