一种古代泥化丝织品模拟样的检测方法,申请号CN201410848087.8-传众专利搜索

一种古代泥化丝织品模拟样的检测方法

申请公布号：CN104483476A

申请号：CN201410848087.8

申请日期：2014.12.31

申请公布日期：2015.04.01

申请人：

中国丝绸博物馆

发明人：周旸;郑海玲;赵丰;王秉

分类号：G01N33/53(2006.01)I;G01N21/31(2006.01)I

主分类号：G01N33/53(2006.01)I

代理机构：

杭州之江专利事务所(普通合伙) 33216

代理人：朱枫

地址：310000 浙江省杭州市西湖区玉皇山路73-1号

摘要：本发明公开了一种古代泥化丝织品模拟样的检测方法，利用直接酶联免疫的方法来检测古代泥化丝织品模拟样中的丝素蛋白成分，即将溶解后的模拟土样上清液包被到酶标板上，然后添加辣根过氧化酶标记的兔抗丝素蛋白抗体形成抗原抗体复合物。洗涤后加入四甲基联苯胺显色液，底物被酶催化为有色产物，根据颜色变化的深浅可进行定性分析。一方面，本方法灵敏度高、成本低，另一方面，本方法特异性强，操作简单，响应速度快，因此能够有效代替现有对古代泥化丝织品的检测方法。

主权项：一种古代泥化丝织品模拟样的检测方法，其特征在于采取步骤如下：1）缓冲溶液的配制：配制PBS 7.4缓冲液：称取KCl 0.2g，KH2PO4 0.27g，NaCl 8.0g，Na2HPO4 1.42g，用800ml蒸馏水溶解并定容至1000ml，调节PH至7.4；配制PBS 9.6缓冲液：称取Na2CO3 0.15g，NaHCO3 0.29g，用800ml蒸馏水溶解并定容至1000ml，调节PH至9.6；2）分别称取1g标准土样，按字母顺序标记为A‑I共九组；按照分组依次加入1ml的丝素蛋白溶液；所述丝素蛋白溶液的浓度单位为g/ml，加入量分别是为10‑11、10‑10、10‑9、10‑8、10‑7、10‑6、10‑5、10‑4、10‑3，所用溶剂为PBS 9.6缓冲液；将上述九组分别搅拌均匀，常温下放置1‑3天；再按照分组依次加入99ml的丝素蛋白溶液，所述丝素蛋白溶液的浓度单位为g/ml，加入量分别是为10‑11、10‑10、10‑9、10‑8、10‑7、10‑6、10‑5、10‑4、10‑3，所用溶剂为PBS 9.6缓冲液；将上述九组分别搅拌均匀，常温下静置2h；各组分别取上清液；3）将步骤2）获得的九组上清液分别取80‑120μl包被于酶标板上；同时单独将10‑3‑10‑5g/ml、溶剂为PBS 9.6缓冲液的丝素蛋白溶液设立为阴性对照组并标记为N，也包被于酶标板上；将上述10组样在4℃下放置12h，然后用PBS 7.4溶液洗涤三次，每次三分钟；4）向A‑I组及阴性对照组N的酶标板孔内分别加入100‑200μl的牛血清白蛋白溶液，所述牛血清白蛋白溶液的质量浓度为1%，溶剂为PBS 7.4缓冲液；之后用保鲜膜封板，在37℃下孵育2h，然后用PBS 7.4缓冲液洗涤三次，每次三分钟；5）向A‑I组的酶标板孔内分别加入100μl的3000‑10000倍稀释的辣根过氧化酶标记的兔抗丝素蛋白抗体，所述稀释溶剂为质量浓度1%的牛血清白蛋白溶液，同时阴性对照组N的孔内加入100μl的PBS 7.4缓冲液代替抗体；将上述10组样品控制温度在37℃下孵育1h；然后用PBS7.4缓冲液洗涤三次，每次三分钟；6）向经步骤5）处理后A‑I组及阴性对照组N的酶标板孔内加底物液质量浓度为1%的四甲基联苯胺溶液80‑120μl，置于黑暗处反应10min；再向各孔中加入1mol/l的H2SO4 溶液80‑120μl，终止反应；7）将步骤6）处理后的酶标板放置于酶标仪中，读取波长λ=450nm处的吸光度数值；比较实验组A‑I与阴性对照组N测得的吸光度OD的值：若ODA‑I/ODN＞2.1，则证明所检测的溶液呈现阳性，若ODA‑I/ODN≤2.1，则证明所测得的溶液呈现阴性；通过阴阳性判断可以推测出丝素蛋白在标准土样中的检出限。