监定木蝨类昆虫之寡核苷酸探针、生物晶片及其监定方法,申请号TW096145249-传众专利搜索

监定木蝨类昆虫之寡核苷酸探针、生物晶片及其监定方法

申请公布号：TWI333980

申请号：TW096145249

申请日期：2007.11.28

申请公布日期：2010.12.01

申请人：

国立中兴大学

发明人：杨曼妙;叶文斌;路光晖;郭美华;吴雅婷

分类号：C12Q1/68

主分类号：C12Q1/68

代理人：蔡坤财台北市中山区松江路148号11楼;李世章台北市中山区松江路148号11楼

地址：台中市南区国光路250号

主权项：一种监别柑橘木蝨(i>Diaphorina citri/i>)、檬果木蝨(i>Microceropsylla nigra/i>)、龙眼木蝨(i>Neophacopteron euphoriae/i>)、桑木蝨(i>Paurocephala sauteri/i>)及巴西蒲桃木蝨(i>Trioza outeiensis/i>)之方法，包含：(a)萃取待测虫体之去氧核醣核酸(DNA)；(b)以SEQ ID NO：17及SEQ ID NO：18增幅待测虫体之粒线体细胞色素氧化酶I基因(COI)片段序列，增幅出之序列为SEQ ID NO：12-16；(c)使用寡核苷酸探针与步骤(b)之产物进行杂合反应，其中该寡核苷酸探针为SEQ ID NO：1、SEQ ID NO：2、SEQ ID NO：3、SEQ ID NO：4、SEQ ID NO：5、SEQ ID NO：6、SEQ ID NO：7、SEQ ID NO：8、SEQ ID NO：9、SEQ ID NO：10、SEQ ID NO：11所示之核苷酸序列；以及(d)监定步骤(c)之杂合反应结果。如申请专利范围第1项所述监别柑橘木蝨(i>Diaphorina citri/i>)、檬果木蝨(i>Microceropsylla nigra/i>)、龙眼木蝨(i>Neophacopteron euphoriae/i>)、桑木蝨(i>Paurocephala sauteri/i>)及巴西蒲桃木蝨(i>Trioza outeiensis/i>)之方法，其中该步骤(b)为使用聚合酶连锁反应进行增幅。如申请专利范围第1项所述监别柑橘木蝨(i>Diaphorina citri/i>)、檬果木蝨(i>Microceropsylla nigra/i>)、龙眼木蝨(i>Neophacopteron euphoriae/i>)、桑木蝨(i>Paurocephala sauteri/i>)及巴西蒲桃木蝨(i>Trioza outeiensis/i>)之方法，更包含使用标记分子标记该步骤(b)之产物。如申请专利范围第3项所述监别柑橘木蝨(i>Diaphorina citri/i>)、檬果木蝨(i>Microceropsylla nigra/i>)、龙眼木蝨(i>Neophacopteron euphoriae/i>)、桑木蝨(i>Paurocephala sauteri/i>)及巴西蒲桃木蝨(i>Trioza outeiensis/i>)之方法，其中该标记分子标记为生物素(Biotin)。一种用于监别柑橘木蝨(i>Diaphorina citri/i>)、檬果木蝨(i>Microceropsylla nigra/i>)、龙眼木蝨(i>Neophacopteron euphoriae/i>)、桑木蝨(i>Paurocephala sauteri/i>)及巴西蒲桃木蝨(i>Trioza outeiensis/i>)之生物晶片，包含一基材；复数寡核苷酸探针，固着于该基材上，该些寡核苷酸探针为SEQ ID NO：1、SEQ ID NO：2、SEQ ID NO：3、SEQ ID NO：4、SEQ ID NO：5、SEQ ID NO：6、SEQ ID NO：7、SEQ ID NO：8、SEQ ID NO：9、SEQ ID NO：10、SEQ ID NO：11所示之核苷酸序列。如申请专利范围第5项所述用于监别柑橘木蝨(i>Diaphorina citri/i>)、檬果木蝨(i>Microceropsylla nigra/i>)、龙眼木蝨(i>Neophacopteron euphoriae/i>)、桑木蝨(i>Paurocephala sauteri/i>)及巴西蒲桃木蝨(i>Trioza outeiensis/i>)之生物晶片，其中该基材之材质包含尼龙膜、高分子材料、矽片或玻璃。一种利用申请专利范围第5项所述之生物晶片监别柑橘木蝨(i>Diaphorina citri/i>)、檬果木蝨(i>Microceropsylla nigra/i>)、龙眼木蝨(i>Neophacopteron euphoriae/i>)、桑木蝨(i>Paurocephala sauteri/i>)及巴西蒲桃木蝨(i>Trioza outeiensis/i>)之方法，包含：(a)萃取待测虫体之去氧核醣核酸(DNA)；(b)以SEQ ID NO：17及SEQ ID NO：18增幅待测虫体之粒线体细胞色素氧化酶I基因(COI)片段序列，增幅出之序列为SEQ ID NO：12-16；(c)使用申请专利范围第5项所述之生物晶片进行杂合反应；以及(d)监定步骤(c)之杂合反应结果。如申请专利范围第7项所述利用申请专利范围第5项所述之生物晶片监别柑橘木蝨(i>Diaphorina citri/i>)、檬果木蝨(i>Microceropsylla nigra/i>)、龙眼木蝨(i>Neophacopteron euphoriae/i>)、桑木蝨(i>Paurocephala sauteri/i>)及巴西蒲桃木蝨(i>Trioza outeiensis/i>)之方法，其中该步骤(b)为使用聚合酶连锁反应进行增幅。如申请专利范围第7项所述利用申请专利范围第5项所述之生物晶片监别柑橘木蝨(i>Diaphorina citri/i>)、檬果木蝨(i>Microceropsylla nigra/i>)、龙眼木蝨(i>Neophacopteron euphoriae/i>)、桑木蝨(i>Paurocephala sauteri/i>)及巴西蒲桃木蝨(i>Trioza outeiensis/i>)之方法，更包含使用标记分子标记该步骤(b)之产物。如申请专利范围第9项所述利用申请专利范围第5项所述之生物晶片监别柑橘木蝨(i>Diaphorina citri/i>)、檬果木蝨(i>Microceropsylla nigra/i>)、龙眼木蝨(i>Neophacopteron euphoriae/i>)、桑木蝨(i>Paurocephala sauteri/i>)及巴西蒲桃木蝨(i>Trioza outeiensis/i>)之方法，其中该标记分子为生物素(Biotin)。一种监别柑橘木蝨(i>Diaphorina citri/i>)、檬果木蝨(i>Microceropsylla nigra/i>)、龙眼木蝨(i>Neophacopteron euphoriae/i>)、桑木蝨(i>Paurocephala sauteri/i>)及巴西蒲桃木蝨(i>Trioza outeiensis/i>)之套组，包含：至少五种寡核苷酸探针，五种寡核苷酸探针包含SEQ ID NO：1、SEQ ID NO：2、SEQ ID NO：3之至少其中之一、SEQ ID NO：5、SEQ ID NO：6、SEQ ID NO：7之至少其中之一、SEQ ID NO：8、SEQ ID NO：9之至少其中之一、SEQ ID NO：10、SEQ ID NO：11之至少其中之一及SEQ ID NO：4所示之核苷酸序列；以及一COI基因专一性引子对，具有SEQ ID NO：17及SEQ ID NO：18所示之序列。