乳腺特异性表达载体及其构建方法,申请号CN200810105011.0-传众专利搜索

乳腺特异性表达载体及其构建方法

申请公布号：CN101265483B

申请号：CN200810105011.0

申请日期：2008.04.25

申请公布日期：2010.09.29

申请人：

中国人民解放军军事医学科学院生物工程研究所

发明人：陈红星;施庚寿;吴晓洁;周颜荣;黄培堂

分类号：C12N15/85(2006.01)I;C12N15/14(2006.01)I;C12N15/11(2006.01)I;C12N5/10(2006.01)I;C12N1/15(2006.01)I;C12N1/19(2006.01)I;C12N1/21(2006.01)I;A01K67/027(2006.01)I

主分类号：C12N15/85(2006.01)I

代理机构：

北京纪凯知识产权代理有限公司 11245

代理人：关畅;任凤华

地址：100071 北京市丰台区东大街20号生物工程研究所

摘要：本发明公开了一种乳腺特异性表达载体及其构建方法。本发明提供的乳腺特异性表达载体的构建方法，包括如下步骤：1)构建DNA片段M0；M0自上游至下游依次为同源臂T1-T6；2)将M0插入载体，得到连续三次基因抓捕载体；3)通过三次同源重组，T5和T6抓获乳蛋白基因座3’调控区；T3和T4抓获完整的外源目的蛋白基因组序列；T1和T2抓获乳蛋白基因座5’调控区。本发明得到了乳蛋白-目的蛋白的杂合基因座，杂合基因座内包含乳蛋白上下游表达调控序列，中间是外源目的蛋白的基因组序列。本发明将为动物乳腺个体表达系统注入新的活力，有力促进乳腺生物反应器表达系统的推广运用。

主权项：乳腺特异性表达载体的构建方法，包括如下步骤：1)构建DNA片段M0；M0自上游至下游依次为同源臂T1、同源臂T2、同源臂T3、同源臂T4、同源臂T5、同源臂T6；所述6个同源臂的长度均为400-600bp；同源臂T5和同源臂T6能通过与乳蛋白BAC同源重组获得乳蛋白基因座3’调控区；同源臂T3和同源臂T4能通过与外源目的蛋白BAC同源重组获得完整的外源目的蛋白基因组序列；同源臂T1和同源臂T2能通过与乳蛋白BAC同源重组获得乳蛋白基因座5’调控区；2)将所述DNA片段M0插入载体中，得到连续三次基因抓捕载体；3)通过与所述乳蛋白BAC进行两次同源重组、与所述外源目的蛋白BAC进行一次同源重组，将步骤2)得到的连续三次基因抓捕载体中的DNA片段M0替换为DNA片段M1，得到所述外源目的蛋白的乳腺特异性表达载体；M1自上游至下游依次为所述乳蛋白基因座5’调控区、完整的所述外源目的蛋白基因组序列、所述乳蛋白基因座3’调控区。