一种小肽的设计与制备方法,申请号CN200510082710.4-传众专利搜索

一种小肽的设计与制备方法

申请公布号：CN100577682C

申请号：CN200510082710.4

申请日期：2005.07.07

申请公布日期：2010.01.06

申请人：

北京化工大学

发明人：陈劲春;李冬冬;刘元锋

分类号：C07K7/06(2006.01)I;C07K1/04(2006.01)I;C07K1/06(2006.01)I;C12P21/00(2006.01)I;C12N15/09(2006.01)I

主分类号：C07K7/06(2006.01)I

地址：100029北京市朝阳区北三环东路15号

摘要：本发明涉及到高F值小肽的设计与制备方法，特别涉及到一个五肽(ELVIR)应用化学合成法和基因工程菌发酵法制备技术以及由此制备的高F值(ELVIR)小肽。应用化学合成法制备高F值小肽ELVIR，采用手工固相合成或以自动合成仪合成。应用基因工程菌发酵制备高F值小肽ELVIR，本发明首先设计并合成一个长度为96bp的DNA片段，通过双酶切(EcoR I+Hind III)连接于pET28(+)a中，以大肠杆菌BL21(ED3)为受体菌，经发酵9小时菌体OD为0.42下罐，获包含体为3.2g/L。采用6M盐酸胍变性包含体蛋白后，经逐步复性获得粗蛋白；用金属螯合柱得目标蛋白原，再用trypsin酶切，切后上Sephadex G10柱，收集第四个峰；该峰样上HPLC柱，出峰时间2.07分。样品经动物实验表明生物活性明显。

主权项：1、一种高F值小肽的生产方法，这种高F值小肽是ELVIR，采用固相化学合成法生产；具体步骤如下：先将组成该肽的五种氨基酸分别用叔丁氧羧基保护各自氨基成BOC-aa，再取BOC-R与氯甲基苯乙烯树脂反应得BOC-R-苄脂；经HCl-HAc脱去BOC成R-苄脂；继续用BOC-I经缩合剂DCCI与R-苄脂成BOC-I-R-苄脂，再去BOC得I-R-苄脂；依此进入第三轮得VIR-苄脂，直至得ELVIR-苄脂；在甲醇中通入干燥氨气进行氨解得ELVIR。