神经干细胞体外扩增和定向诱导分化为多巴胺能神经细胞的方法,申请号CN03109288.8-传众专利搜索

神经干细胞体外扩增和定向诱导分化为多巴胺能神经细胞的方法

申请公布号：CN100506975C

申请号：CN03109288.8

申请日期：2003.04.09

申请公布日期：2009.07.01

申请人：

中国人民解放军军事医学科学院野战输血研究所

发明人：裴雪涛;郑敏;岳文;焦文仓;赵连旭

分类号：C12N5/00(2006.01)I;C12N5/06(2006.01)I

主分类号：C12N5/00(2006.01)I

地址：100850北京市海淀区太平路27号

摘要：本发明的目的是提供一种将神经干细胞大量扩增后体外定向诱导分化为多巴胺能神经细胞并移植于脑纹状体并在原位分化为多巴胺能神经细胞的方法。为实现上述目的，本发明采用以下技术方案：1)利用干细胞的生物学用采用无血清培养的方法富集神经干细胞，利用干细胞的自我更新和增殖特性用促分裂增殖因子对神经干细胞进行扩增，从而达到获得大量神经干细胞的目的。2)分离出的细胞在体外进行定向诱导分化的方案，其特征在于特定培养代数(第3-5代细胞)进行诱导，以特定的药物抗坏血酸，特定浓度(10-100nM)进行定向诱导；3)培养出的细胞在体内进行定向分化的方案，其特征在于利用特定的细胞密度和注射方式使获得的大量神经干细胞在脑部纹状体在原位分化为多巴胺能神经元。本发明提供了神经细胞缺失后的补充来源，为干细胞移植替代临床治疗帕金森疾病奠定了基础，并为与之相关的药物开发和筛选提供了一种新的模型。

主权项：1. 一种神经干细胞体外扩增和定向诱导分化的方法，其特征在于，包括以下步骤：步骤一：神经干细胞的扩增：将神经干细胞经胰酶消化，细巴斯德吸管吹打成单细胞悬液后以1×105/ml种植于新培养液中，每7天换液传代一次得到神经干细胞NSC；所述培养液含DMEM/F12，2％B27，EGF 20ng/ml，bFGF 20ng/ml，青霉素和链霉素；步骤二：神经干细胞体外定向诱导分化：将新鲜传代的NSC以5×104/ml接种于放置有包被多聚赖氨酸盖玻片的24孔板内，1ml/孔，贴壁培养3天后更换培养液为DMEM/F12，2％B27，并加入抗坏血酸使其终浓度为10nmol～100nmol，3天后半量换液，第6天时终止诱导，得到向多巴胺能神经元分化的NSC。